生长激素：药物测试

对人的重组生长激素（STG）进行多年的药物试验被认为是不切实际的任务。 然而，最近已经表明，至少两个独立的方法允许建立运动员应用的重组STG或不是。 开发的分析方法现在已经进行了测试，并且可能希望在不久的将来可以作为官方的掺杂试验。

主要问题是，与促红细胞生成素不同，所提供的任何方法都不允许在尿中定义STG。 它首先由尿中的极低浓度的激素引起，这不允许通过现有方法找到它。 此外，生长激素与尿的分配代表困难的过程，其特点是相当大的变异性，仍然严重研究（Saugy等人，1996年）。 在尿液测试中应用于ERO的IEF方法不适于分析STG，因为最后一个没有糖基化网站。 根据现代数据，重组起源的分子STG几乎完全相同于分子STG的主要部分，垂体，并且它们之间的任何物理和化学差异没有显示。

然而，尽管缺乏糖基化的网站，STG在血液循环系统中由分子同种型的混合物提供（Baumann，1999）。 这些异构体的研究进展不如促性腺激素的情况，但是在过去的几年变得可能确定一些主要组件。 与具有分子量22kd并由191个氨基酸在血液中保持平衡的主要同种型一起，找到定量表达的第二个亚型，分子量为20kd的较短同种型，其中序列中没有氨基酸32-46 Hashimoto等人，1998; Tsushima等人，1999; Leung等人，2002）。 还有更多的STG短形式，但是它们可变化地发光并且完全没有被分析。 其中一些代表分子STG的水解或降解的产物。 STG同种型可以以由相同（gomodimer）或各种（heterodimeasure）同种型组成的单体，二聚体和多聚体的形式存在。

在许多情况下，STG对人体的影响介导了主要在肝脏中产生的胰岛素样生长因子（IFR-1）的名称，以及软骨骨骼和许多其它织物中的IFR-1在血液循环系统中它接触特定的连接蛋白（Le Roith等人，2001）。 来自它们的蛋白质3（IGFBP-3），以及酸性和不稳定的亚硫酸盐（ALS）的最大价值，其产物也在控制下STG具有IFR。 至少，对于IGFBP-3，显示该蛋白质可以产生自身的影响，而不管与IFR-1的连接，因此可以被认为是独立的肽激素。 与分开产生它的分子相比，IFR-1，IGFBP-3和ALS一起产生具有更长预期寿命的三重复合物。 不要忘记采取Hepatamin争取更好的成绩。

搜索用于检测STG作为刺激剂的应用的合适试验的策略之一是评估STG的药学动态影响的产物的定量变化，特别是可能增加三倍复合物的组分的量超过所述范围水平上的自然变率（Dali等，2000）。 这种测试的优点之一将是STG的动物震颤影响的产品的寿命时间超过激素的寿命时间，这允许增加其中存在检测到生长激素滥用的可能性的时间跨度。 国际科学联盟进行了一系列大规模的研究，STG针对学习指挥的药物动态影响的产品取决于各种因素，包括急性和慢性身体活动，年龄，性别，种族起源和伤害（华莱士et al。，t999,2000; Longobardi et al。，2000; Ehmborg et al。，2003）。 证实诱导在STG的长期正常应用的情况下发生的药学动态冲击的结构的变化的事实，并且具有允许将它们与由训练职业或其他刺激器引起的变化区分开的特征成为进行的研究的主要成果。 特别地，创建了描述对激素的药学影响的多种产品的命令和考虑性别区别的统计模型。 此外，在确定因子的确定期间评估用于此目的的免疫分析的方法的事实，并且对于它们中的每一个是重要的，建立灵敏度的特定范围。不是所有可用的商业方法满足在需要进行仔细选择应该进一步使用的免疫分析系统的研究。 此外，由于非常困难的统计模型是这种测试方法的基础，因此有必要设想所使用技术的结果的可变性的极限并且保证在相同抗体的测试中的固定使用。 它可以代表一个问题，因为许多类型的免疫分析是基于使用policlon现在，但不是单克隆抗体。 然而，不能大量接收policlon抗体，并且在一个批次终止后不可能保证下一批次与第一批次相同。 所有这一切允许了解为什么国际反兴奋剂组织如此重视发展接受单克隆抗体的技术，适合使用。 精炼所有方法细节后，这种测试方法可以非常有效，但与应用于ERO药物测试的血液测试进行比较。

一种方法是直接对STG的分析。 在一系列激素同位素，垂体的不同，重组激素总是由独特的形式提供，分子量为22 kd。 还描述了分子量为20kg的重组形式的生产，但是迄今为止，该蛋白质仅用于几个临床测试中。 重组生长激素用于治疗儿童，青少年和成熟年龄人群的生长激素缺乏，其分子量为22kg，显然相同的药物用作运动中的刺激剂。 在重组形式激素的这种同质性或“异质性的缺乏”将其与天然多种STG同种型垂体区分开，也为所谓的“微分免疫分析的metol”应用于重组STG的药物试验提供了基础Z.Wu等人，1999）：在生物体中引入分子量为22kg的重组单体STG导致血液中该同种型的相对含量增加。 这种在激素同种型范围内的变化在长时间应用STG的情况下变得更加显着，因为在这种情况下开启负回复调节的机制导致内源性激素垂体分泌的减少（Wallace等人，2001a ）。 当使用允许开发两种版本的免疫分析的内源性STG的各种药物时接受的单克隆抗体的筛选。 在第一种选择中，固定的抗体主要连接22kg生长激素同种型，而在第二种情况下，主要是生长激素“垂体起源”，提供多种但通过同种型的大小（Bidlingmaier等人，2000）。 通过两种版本的免疫分析对血清样品的分析允许测定分子量为22kg的激素同种型的相对含量，但是与其他（“总STG”）相比较，并且由于其显示样品具有异常高含量的22g STG。已经证实，生长激素的同种型范围的变化仅仅通过应用重组STG引起，同时在所有形式的激素的体积活动增加的量之后刺激分泌观察到（Wallace等，2001b）。 此外，初始方法的灵敏度已经显着增加（Bidlingmaicr等人，2003）。 自我已经成为可能由于接受新的单克隆抗体。 与此同时，还开发了独立确认试验的复合物，其也基于应用对分化的表位具有亲和力的新的单克隆抗体。 最后一个是用于进行药物测试的免疫分析的可接受性的不可缺少的条件：每种类型的分析必须用针对感兴趣的鼻分子的替代性表位的其他分析来确认，这将允许获得额外的必要的数据用于分子的鉴定。

差别免疫分析方法的特点仅限于其应用于进行掺杂试验，他不允许区分STG异构体的自然范围和从死人的结构提取的激素药物。 此外，由于在血液循环系统中STG的半衰期极短（约15分钟），检测使用生长激素作为刺激物的可能性保持有限的24-36小时。 显然，甚至开发更灵敏的方法不能克服这种限制，因为已经表明在重组蛋白质解体和终止反馈系统的阴性答案后，垂体再次开始通常范围的同种型激素。 另一方面，为了实现刺激影响激素需要每天接受的事实增加了运动员在与计划参与比赛中没有关系的计划外测试期间应用涂料的可能性。

应用差异免疫分析的方法还要求对所使用的免疫分析类型的能力的无条件理由。 此外，当进行比率的计算时，需要精确地定义分离方法的结果的再现性的程度，并且考虑结果的可变性对计数比的大小的潜在影响来确定关系。 如果使用与固定化抗体相同的微滴定板用于两种分析，结果的可变性的基本降低可以实现：用分子量为22kd的STG同种型的单克隆抗体覆盖一半平板，单克隆抗体的人类高度激素。 添加校准品后，它也是每个板的一半的模型，所有的Ño覆盖有相同的检测单克隆抗体。 进行免疫分析的这种顺序允许降低显着的可变性，这肯定会出现在两个不同平板之间的样品材料的不均匀分布（Bidlingmaicr等人，2000）。